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Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用戶指南

更新時(shí)間：2025-04-28 點(diǎn)擊次數(shù)：465

Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 用戶指南

——精準(zhǔn)定量細(xì)胞凋亡抑制因子的科研利器

一、產(chǎn)品概述

Eaivelly 人細(xì)胞凋亡抑制因子 ELISA Kit 是基于雙抗體夾心法（Sandwich ELISA）的定量檢測(cè)試劑盒，專為科研單位設(shè)計(jì)，用于人血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及尿液中細(xì)胞凋亡抑制因子（IAP）的精準(zhǔn)定量分析。該試劑盒通過(guò) 高效、靈敏、特異的抗體結(jié)合酶聯(lián)反應(yīng)，生成與目標(biāo)蛋白濃度成正比的顏色信號(hào)，支持 0.2 IU/L 至 6 IU/L 的檢測(cè)范圍，靈敏度達(dá) 3 pg/mL（具體批次可能略有差異）。

二、核心組件與參數(shù)

組件	規(guī)格	功能說(shuō)明
酶標(biāo)包被板	48 孔或 96 孔	預(yù)包被高親和力 IAP 單克隆抗體，支持高通量樣本檢測(cè)。
標(biāo)準(zhǔn)品	2700 ng/L（0.5 mL）	凍干粉，復(fù)溶后用于構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線（濃度梯度：1800、1200、600、300、150 ng/L）。
酶標(biāo)試劑	3 mL（48 孔）/6 mL（96 孔）	HRP 標(biāo)記的 IAP 多克隆抗體，與目標(biāo)蛋白結(jié)合后催化底物顯色。
顯色劑 A/B	各 3 mL（48 孔）/6 mL（96 孔）	TMB 底物，HRP 催化下生成藍(lán)色產(chǎn)物，酸化后轉(zhuǎn)為黃色。
終止液	3 mL（48 孔）/6 mL（96 孔）	2 M 硫酸，終止顯色反應(yīng)，穩(wěn)定顏色信號(hào)。
濃縮洗滌液	20 mL（20 倍濃縮）	使用前需用蒸餾水稀釋至 1 倍工作液，用于去除未結(jié)合物質(zhì)。
說(shuō)明書(shū)與封板膜	各 1 份	提供操作指南及密封電泳板，防止蒸發(fā)。

三、技術(shù)優(yōu)勢(shì)

高效靈敏

采用高效價(jià)、高特異性抗體，檢測(cè)限低至 3 pg/mL，確保低豐度蛋白的精準(zhǔn)捕獲。
重復(fù)性 CV% < 9%（批內(nèi)）和 < 11%（批間），保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定性。

廣泛適用性

支持多種樣本類型，包括血清、血漿、組織勻漿液、細(xì)胞培養(yǎng)上清液及尿液，滿足不同研究需求。
吸附性能優(yōu)異，固相載體空白值低，孔底透明度高，確保顯色均勻。

節(jié)省成本

預(yù)包被板設(shè)計(jì)減少人工包被步驟，降低操作難度與試劑消耗。
試劑盒提供 48 孔或 96 孔兩種規(guī)格，適配不同實(shí)驗(yàn)規(guī)模。

四、操作流程

（一）樣本準(zhǔn)備

血清/血漿

室溫靜置 10-20 分鐘使血液自然凝固，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，取上清。
如需長(zhǎng)期保存，分裝后置于 -20℃ 或 -70℃，避免反復(fù)凍融。

組織勻漿液

切割組織后，按 1:10（w/v）加入 PBS（pH 7.4），勻漿后 2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，取上清。

細(xì)胞培養(yǎng)上清液

直接收集上清，2000-3000 rpm 離心 20 分鐘，去除細(xì)胞碎片。

（二）標(biāo)準(zhǔn)曲線構(gòu)建

將標(biāo)準(zhǔn)品復(fù)溶后，用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液進(jìn)行 2 倍梯度稀釋，得到 1800、1200、600、300、150 ng/L 的濃度梯度。
在酶標(biāo)包被板上設(shè)置 10 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)孔，每孔加入 50 μL 稀釋后的標(biāo)準(zhǔn)品。

（三）加樣與孵育

在待測(cè)樣品孔中加入 40 μL 樣品稀釋液和 10 μL 樣本（稀釋 5 倍）。
每孔加入 50 μL 酶標(biāo)試劑，空白孔僅加稀釋液與酶標(biāo)試劑。
用封板膜密封后，37℃ 孵育 30 分鐘。

（四）洗滌與顯色

棄去液體，每孔加滿洗滌液，靜置 30 秒后棄去，重復(fù) 5 次。
每孔加入 50 μL 顯色劑 A 和 B，輕輕震蕩混勻，37℃ 避光顯色 15 分鐘。
每孔加入 50 μL 終止液，立即在 450 nm 波長(zhǎng) 下測(cè)定 OD 值。

（五）結(jié)果計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD 值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
根據(jù)樣品 OD 值，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算實(shí)際濃度，再乘以稀釋倍數(shù)（5 倍）。

五、應(yīng)用場(chǎng)景

細(xì)胞凋亡機(jī)制研究

定量分析不同處理?xiàng)l件下 IAP 表達(dá)變化，揭示凋亡調(diào)控網(wǎng)絡(luò)。

腫瘤生物學(xué)研究

評(píng)估 IAP 在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)水平，探索其作為治療靶點(diǎn)的潛力。

藥物研發(fā)

檢測(cè)藥物對(duì) IAP 表達(dá)的調(diào)控作用，輔助抗凋亡藥物的篩選與優(yōu)化。

疾病診斷

分析 IAP 在血清或組織中的異常表達(dá)，輔助相關(guān)疾病的早期診斷。

六、注意事項(xiàng)

樣本質(zhì)量

避免使用溶血、脂血或高濃度 NaN? 的樣本，以免干擾檢測(cè)結(jié)果。

操作規(guī)范

加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi)，避免因孵育時(shí)間差異導(dǎo)致誤差。
顯色反應(yīng)需在加終止液后 15 分鐘內(nèi) 完成測(cè)定。

試劑保存

未開(kāi)封試劑盒需置于 2-8℃ 保存，開(kāi)封后未用完的板條需密封保存。
濃縮洗滌液在低溫下可能結(jié)晶，使用前需水浴加溫助溶。